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酶标仪基本知识及其检测原理

时间:2024-06-13 点击:330次

酶标仪基本知识及其检测原理

 

 

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酶标仪有单波长和双波长检测功能有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的“单波长"就是使用一种对显色具最大吸收的波长即450 nm492 nm进行比色测定;而“双波长"则除了用对显色具最大吸收的波长即450 nm492 nm进行比色测定外,同时用对特异显色不敏感的波长如630 nm进行测定,酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。630 nm波长下得到的吸光度是非特异的,来自于板子上诸如指纹、灰尘、脏物等所致的吸收。因此,在ELISA比色测定中,最好使用双波长,且不必设空白孔。

 

二、测定的吸光度范围   

 

通常,酶标仪的吸光度测定范围在。0-2.5之间即可以满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在0-2.5之间,但现在基本上都做了拓宽,可达到3.5以上,并且能保持很好的精密度与线性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度测定范围为0-3.5,而Multiskan Ascent的吸光度测定范围(Abs)达0-4.0,在0-4.0范围,线性误差不超过±2.0%,在0.3-3.0吸光度范围内,测定精密度CV小于±0.2%3.0-4.0 Abs范围内,测定精密度CV小于士0.2%。因此,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。

 

三、光学系统   

 

酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为812通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。

 

四、检测速度   

 

酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快,通常在数秒钟内,如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2MK-3检测96孔只需2s(连续模式)或5s(步进模式)。Multiskan Ascent为单通道检测,亦只需9s(连续模式)或14s(步进模式)。又如BioRad公司的Benchmark的检测速度单波长为7s,双波长为15s

 

五、震板功能   

 

酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀,使板孔内颜色均一。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节,如LabsystemsMK-2;有的则较为固定,如BioRad 550。使用有震板功能的酶标仪,在进行ELISA测定显色反应完成加入终止剂后,可不必振荡混匀,直接放人酶标仪上测定即可。

 

六、温育功能   

 

温育功能是指酶标仪本身能按要求自动精确地控制仪器内部的温度,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱。目前,只有少部分酶标仪具有此种功能,如Labsystems公司的Multiskan AscentBioRad公司的BenchmarkBiotek公司的ElxS08等。温育功能只是酶标仪的一个附加功能,是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择,则可根据自己实验室的条件及需要来决定。

 

 

 


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