二级生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。
二级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器，所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。二级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能对试验品或产品保护，目前已较少使用。
二级生物安全柜为连接排气系统的安全柜，连接安全柜排气导管的风机连接紧急供应电源，目的在断电下仍可保持安全柜负压，以免危险气体泄漏如实验室，70%气体通过排气口HEPA过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至工作区，B2型为全排型安全柜，无内部循环气流，可同时生物性和化学性的安全控制。
二级生物安全柜广泛应用在医疗卫生、疾病预防与控制、食品卫生、生物制药，环境监测以及各类生物实验室等领域，是保障生物安全和环境安全的重要基础，属于"民生"计量的范畴。早在30年前，生物安全柜检测已经在开展，目前主要依据欧盟或美国的标准。在，目前还没有统一的生物安全柜检测国家标准，二级生物安全柜检测方法十分混乱，既有建设部的标准，又有药监局的标准，还有采用欧盟标准、美准或各生产厂的企业标准的。
二级生物安全柜工作区采用四面（左右二侧、后部、底部）负压环绕设计工作区内，保护性更好、更安全可在安全柜前方更换、维修过滤器及风机，风机的电机应保证当安全柜在正常运行而不调整电机的速度控制，经过滤器的风压下降50%时，风机的排气量下降应不过10%，前玻璃窗有10度生理斜度，视角更大，更具人性化，且出安全高度具有声光报警功能；安全玻璃钢化，防UV，双层夹胶防爆安全玻璃；前玻璃窗，由脚踏控制或手动开关或遥控控制
二级生物安全柜内部工作区域，工作区内墙体及工作台面为304#不锈钢，操作区三面一体成型，三面无接缝圆角结构,不留死角，易于清洁，高亮度彩色VFD显示屏,实时动态显示操作区的下降气流流速和流入气流流速遥控控制，减少使用者与安全柜的直接接触，更能保护使用者。二级生物安全柜具有预约定时功能，能自动消毒、自动开关机，提高工作效率。
