【关键词】 臭氧
摘 要 采用KCF-G30臭氧发生器进行消毒，结果表明：对金黄色葡萄球菌180 min杀菌率达到90.1％，消毒后洁净区(静态动态)表面微生物的活菌数及沉降菌菌落较消毒前有大幅度的下降，大大低于相应洁净的限度。
关键词 臭氧；灭菌；空气消毒
臭氧具有杀菌力强，不产生残余分子污染的性能［1］，其杀菌过程为强氧化作用，使微生物细胞中的多种成分产生反应，从而产生不可逆转的变化而死亡 ［2］。本文用KCF-G30臭氧发生器进行消毒，利用HVAC系统的循环风作为臭氧的载体。臭氧发生器安装在空调机组中，消毒时，先启动消毒程序，臭氧发生器自动开启，产生的臭氧通过HVAC系统的循环风送到洁净区的各房间中，使空气中的臭氧浓度分布均匀，从而达到消毒灭菌的目的，使洁净区生产的外用液体制剂达到GMP要求的相应，并对臭氧的灭菌效果进行测试。
1 仪器与材料
1.1 仪器 KCF-G30臭氧发生器2台（康尔公司），G-1型真空式手动采样器，洁净车间的容积为 ： 1050 m3，室内温度25 ℃，相对湿度60%。
1.2 菌种
金黄色葡萄球菌。
1.3 主要试剂
生理盐水，生物指示剂。
2 方法与结果
2.1 臭氧消毒试验
2．1．1 培养基平皿的制备
将Φ90 mm×15 mm的培养皿置于160 ℃干热灭菌120 min，将灭菌后培养基加热熔化，冷至45 ℃。 在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15 mL。待营养琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30~35 ℃恒温箱中培养48 h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用(制备好的培养基平皿可在2~8 ℃的环境中存放2周)。
2．1．2 生物指示剂的制备
从金黄色葡萄球菌第四至第十四代的斜面,挑取菌苔制备菌液。临用前将菌液作适当稀释后，移种于营养琼脂培养基的平板中,并使之在培养基表面均匀分布。
2．1．3 测试方法
选取关键房间(配液间、灌装间)用菌液培养皿采样，臭氧发生器开启的同时打开注有菌液的培养皿上盖，每隔1 h分别取回2个预先放置菌液的培养皿，连续监测5 h。 把培养皿放入30~35 ℃恒温箱中培养48 h，进行菌落计算。重复以上操作5次，取平均值计算。
2．1．4 以未经臭氧处理的培养皿做空白对照。
2．1．5 臭氧发生器在不同的工作时间内的杀菌效率以杀菌率(%)表示，见表1。表1 臭氧发生器在不同的工作时间内的杀菌率(%)
2．2 消毒后对空间沉降菌的测试效果比较
消毒前使静压差、换气次数、空气流速必须控制在十万的规定值，在室内温度23 ℃，相对湿度60%。 测试人员必须穿戴符合环境的工作服，静态测试时室内测试人员不得多于2人。在净化空调系统正常运行不少于30 min后开始测试。采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经30 min时间，在30~35 ℃条件下让其繁殖到可见的菌落进行计算，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数。在室内温度 25 ℃，相对湿度62%，开启臭氧发生器180 min后，臭氧浓度达到10.0 mL/m3。选取关键房间(配液间、灌装间)用菌液培养皿采样，重复以上操作5次，计算平均值。消毒前后对空间沉降菌的测试效果比较见表2。
由表2可见，洁净区经臭氧消毒后，洁净厂房空间沉降菌动态测试大大低于洁净区所要求的限度，达到十万级洁净要求。
2．3 表面微生物的测试
在室内温度 23 ℃，相对湿度60%，开启臭氧发生器180 min后，臭氧浓度达到10.0 mL/m3。选取关键房间(配液间、灌装间)，分别在设备、操作台、墙壁、地面等的开放表面与死角、缝隙处取样，取样面积：25 cm2，用事先经无菌水或缓冲液湿润的无菌纱布或脱脂棉充分擦拭。将取样后的棉签放入灭菌带塞三角瓶生理盐水中，振摇，按微生物检查法进行检测，同时做阳性和空白对照。重复以上操作5次，计算平均值。消毒前后洁净区表面微生物的测试效果比较见表3。表2 消毒前后对空间沉降菌的测试效果比较（略）表3 臭氧消毒前后洁净区表面微生物的测试效果比较（略）
由表3可见，洁净区经臭氧消毒后，洁净厂房空间表面微生物动态测试大大低于洁净区所要求的限度，达到十万级洁净要求。
2．4 臭氧浓度测试
将检测管的两端封口在采样器前端切割孔中折断，然后再把检测管插在采样器的进气口上，对准所测气体，转动采样器手柄，使手柄上的红点与采样器后端盖上的红线相对。拎开手柄到所需位置固定。3 min后，当检测管变色的前端不再往前移动时，取下检测管，从检测管上即可读出所测气体的浓度。
2．4．1 臭氧浓度-时间分布测试
以臭氧发生器开启60 min后，选取送风管zui末端且风量较少的房间进行(脱外衣间)，室内温度25 ℃，相对湿度60%。用G-1型真空式手动采样器采样，共取5个采样点，每一采样点应同时采两个平行样，交叉重复以上操作3次，计算平均值，结果见表4。表4 臭氧浓度-时间分布测试（略）
由表4可见，臭氧发生器开启60 min，臭氧浓度达到5 mL/m3，并一直上升至关机前，关闭臭氧发生器90 min，臭氧浓度降到零，达到安全标准。
2．4．2 臭氧浓度-空间分布测试
选取关键房间(配液间、灌装间),用G-1型真空式手动采样器，室温25 ℃，相湿度60%，臭氧发生器开启60 min后采样，共取5个点，每一采样点应同时采两个平行样，交叉重复以上操作3次，计算平均值，结果见表5。表5 臭氧浓度-空间分布测试
由表5可见，臭氧浓度-空间分布测试结果表明臭氧浓度分布均匀。
3 讨论
臭氧(O3)是氧的同素异形体，由3个氧原子组成。常温常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧气(O2)和单个氧原子(O)。氧原子具有很强的活性，对细菌、病毒等微生物有强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必需的酶，破坏其细胞膜，导致新陈代谢障碍并抑制其生长，再继续渗透破坏其细胞膜［3］，将其杀死，多余的氧原子则会自行重新结合成为普通的氧分子。本试验证明，KCF-G30臭氧发生器对金黄色葡萄球菌180 min时杀菌率达到90.1％，240 min杀菌率达到92.1%。由表1我们可进一步看出，臭氧的浓度是随时间的增加而增强(开机时间越长臭氧浓度越高)，同时还证明消毒后洁净区(静态动态)表面微生物测试的活菌数应较消毒前有大幅度的下降，大大低于相应洁净的限度。此外还证明在臭氧发生器开启60 min后所有洁净室臭氧浓度达到5 mL/m3。由于甲醛熏蒸灭菌不安全，人工紫外灭菌效果又受物体阻挡及照射距离影响，臭氧则不受此影响，且臭氧具有消毒后可逐渐分解为氧，对人体无害，并能自行消除等优点，因此可以广泛用于生产车间的洁净消毒［4］。
